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广州一夫妻找代孕生子_VQLD9_15957_女儿突发白血病,离婚父母违背伦理,为脐带

发布时间:2023-03-23 点击数:863

由胡坤执导

秦昊、任素汐、聂远、谢可寅领衔主演

>

黄米依

>

特别主演的家庭生活剧《亲爱的小孩》

正在哈趣影视热播

>

剧集即将完结

豆瓣正式开分

高达8.1分

>

成为近期在播剧集中

口碑最高的影视剧

该剧根据电影

《左右》改编

>

讲述了一对

已经离异的父母

>

为了挽救患白血病的女儿所历经的纠葛和抉择

当被医生建议

再生一个小孩用脐带血来救命

>

已重组家庭的他们该何去何从的故事

禾禾

>

是肖路和方一诺的孩子

方一诺第一次要孩子

于是对孩子的问题感到十分紧张

恰巧她的丈夫肖路总是当甩手掌柜

对待老婆孩子也没有那么上心

致使他们的家庭矛盾越来越突出

方一诺在照顾孩子心力交瘁的时候

肖路

>

甚至还因

广州通过代孕获得龙凤胎

酒后乱性而出轨

>

虽然肖路最后也没有和第三者走到一起

但这件事也是点燃两人矛盾的催化剂

夫妻两人最终离婚

>

后来方一诺又遇到了真心诚意待她的

谢天华

>

并且将禾禾

视如己出

>

而肖路也遇到了善解人意的

董帆

>

虽然禾禾不由肖路抚养

但董帆也是经常可以理解肖路因孩子被领导责骂

并且

不排斥肖路与禾禾之间的相处

>

两个家庭各自开启新生活

又逐渐步入了正轨

万万没有想到

广州一夫妻找代孕生子_VQLD9_15957_女儿突发白血病,离婚父母违背伦理,为脐带

禾禾生病住进医院检查

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结果发现患上了白血病

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方一诺与女儿

配型失败后

>

让自己的父母也前去配型

最终结果都不尽人意

方一诺只好再次联系肖路

肖路配型也不成功

>

就在方一诺走投无路时

医生建议说

夫妻可以用二胎脐带血

>

试试

这让方一诺看到了新的希望

于是经过各种心理建设

不管任何阻碍她都想找肖路再生一个孩子

两个重组家庭都没有自己的孩子

纵使谢天华再理解方一诺

也依然接受不了

不过最后谢天华还是妥协了

甚至不愿离婚,

就算一诺再生二胎

>

这个孩子谢天华也会

当做

自己亲生的

>

董帆和肖路的问题更加复杂

他俩婚后董帆一直想要自己的孩子

但肖路总是推脱,结果为了救禾禾

他同意与前妻再生孩子

方一诺和肖路打算做试管婴儿

>

但因方一诺检查出现问题

试管手术暂时不能做

>

他们只能靠自己生

>

于是一诺和肖路背着现任去宾馆

>

董帆赶紧上门找谢天华想办法

在大雨滂沱中,两人伤心人隔着卷帘门心碎痛苦

另一头在破旧宾馆的肖路和一诺

两人带着复杂的情绪并没有走出那一步

>

愧疚的一诺给母亲打电话忍不住哭了起来

再回到医院的时候,看到忙碌的谢天华

她第一次对丈夫表达了心中的情意

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没过多久,

方一诺被检查出意外怀孕了

>

这个孩子是她和谢天华的

>

偏偏在这个时候,禾禾的病情突然严重起来

方一诺

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决定打掉胎儿,再重新与肖路生第二胎

>

一直以来,谢天华就像一个圣人一样

无条件的包容和支持

出钱出力奉献出自己全部的爱

但方一诺这次彻底伤了谢天华的心。

在最新预告中,谢天华终于忍无可忍

疯狂地跑到医生那

举报方一诺和肖路违背道德底线的卑劣行径

>

再次怀孕的方一诺会打掉孩子吗?

谢天华这次举报让他俩的婚姻还能延续吗?

禾禾最终能被治好吗?

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ELISA样本制备指南及注意事项

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1

定义及介绍

ELISA(enzyme linked immunosorbent assay,酶联免疫吸附测定)是最基础的免疫学实验之一,其理论基础是抗原抗体的特异性反应。ELISA因其特异性强、灵敏度高、稳定性好而被广泛使用。ELISA试剂盒检测样品包括血清、血浆、细胞培养上清、灌洗液或尿液等生物样本,实验操作步骤并不繁琐,但实验完成后需要把样本检测结果OD值转化为浓度值,从而供下一步分析所用,因此样品的预处理对于后续数据处理和结果分析非常重要。



样本制备指南


1

血清

全血样品于室温放置2小时或2-8℃过夜后于2-8℃,1000×g离心20min,取上清即可检测。收集血液的试管应为一次性的无内毒素试管。避免使用溶血,高血脂样品


2.血浆

抗凝剂推荐使用EDTA-Na

2

,样品采集后30min内于2-8℃,1000×g离心15min,取上清即可检测。

3组织匀浆/组织全蛋白

用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液,称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。最后将匀浆液于2-8℃,5000×g离心5-10min,取上清检测。

其余方法:在分析天平(AL204型)上,称量50-100mg组织样本。在样本中加入5倍质量体积的含1%PMSF的1×PBS缓冲液;并用小剪刀等工具将组织样本剪碎(尽可能小块)。注:1×PBS缓冲液使用前,需加入PMSF,现用现加,PMSF终浓度为1mM。打开超声破碎仪,将超声破碎仪的功率调至25%,超声时间2s,间隔时间5s,总时间2min。放入样本,冰上超声3min。视样本匀浆情况调整总时长。超声完成后,将样本放于4℃或冰上裂解30min。打开离心机,将转速调至12000×g;将样本放入离心机,离心10min,取上清,按需要分装,于-20℃贮存。注:留取20μL样本,用于后续BCA法测定样本蛋白含量。

组织匀浆液或组织全蛋白中的蛋白浓度对于检测实验的影响至关重要,建议样本蛋白浓度至少1mg/mL以上,较低浓度蛋白的组织匀浆液有可能导致ELISA检测失败。


4.细胞提取液

贴壁细胞

用冷的PBS轻轻清洗,然后用胰蛋白酶消化,1000×g离心5min后收集细胞;

悬浮细胞

可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每10

6

个细胞中加入150-200μLPBS重悬(推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂;若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。将提取液于2-8℃,1500×g离心10min,取上清检测。注:留取20μL样本,用于后续BCA测定。

其余方法:

对于

贴壁细胞

:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。以2百万细胞为例,在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液,震荡混匀细胞,4℃或冰上裂解30min。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。必要时可以进行超声处理,超声步骤与组织样本相同。

对于

悬浮细胞

:离心收集细胞,以2×10

6

细胞为例,在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液,震荡混匀细胞,4℃或冰上裂解30min。用手指轻弹悬浮细胞以充分裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成(5-10)×10

5

细胞/管,然后再裂解。必要时可以进行超声处理,超声步骤与组织样本相同。注:1×PBS缓冲液使用前,需加入PMSF,现用现加,PMSF终浓度为1mM。打开离心机,将转速调至12000×g;将样本放入离心机,离心10min,取上清,按需要分装,于-20℃贮存。注:留取20μL样本,用于后续BCA法测定样本蛋白含量。



5.细胞培养上清或其他生物体液

收集液体后于2-8℃,1000×g离心20min,除去杂质及细胞碎片。取上清检测。注:因细胞培养基中的胎牛血清影响或其他生物体液中杂蛋白的影响,不建议进行BCA法测定样本蛋白含量。

实验细节与注意事项

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1


收集血液应避免产生溶血现象。红细胞破碎,释放大量的过氧化物酶,会影响ELISA检测中的辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)的酶促反应,造成检测结果的不确定性。

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2



样品收集后若在1周内进行检测可保存于2-8℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或-80℃(3个月内检测),避免反复冻融。在检测前,冷冻过的样本应缓慢地融化并离心除去冻融过程产生的沉淀物。室温混匀后使用。

0

3


试剂盒检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围,建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度并通过预实验确定样本的实际浓度情况。如果样品中待测物浓度过高或过低,请对样本做适当的稀释或浓缩。

04


检测样本的稀释推荐多步稀释法,常规稀释检测为血清/血浆检测稀释度为2倍、20倍、200倍;细胞上清稀释度为5倍、50倍、500倍;建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度。

对于稀释倍数比较大的检测样本,参考稀释方案如下:

稀释100倍:一步稀释。取5μL样本到495μL标准品/样本稀释液内,做100倍稀释;

稀释1000倍:两步稀释。取5μL样本到95μL标准品/样本稀释液内,做20倍稀释,再取5μL 20倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内,做50倍稀释,总共稀释1000倍;

稀释100000倍:三步稀释。取5μL样本到195μL标准品/样本稀释液内,做40倍稀释,再取5μL 40倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内,做50倍稀释,最后取5μL 2000倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内,做50倍稀释,总共稀释100000倍;

每步稀释时取液量不少于3μL,稀释倍数不超过100倍。每步稀释都需混合均匀,避免起泡。


05



若所检样本不在说明书所列样本之中,建议做预实验验证其检测有效性。

06


若使用化学裂解液制备组织匀浆或细胞提取液,由于引入某些化学物质会导致ELISA测值出现偏差。

07


某些重组蛋白可能与试剂盒中捕获或检测抗体不匹配而出现不能检测的情况。

08



对于组织匀浆、组织全蛋白、细胞提取液等蛋白提取样本,经BCA法测定样本蛋白含量后,建议进行蛋白浓度的统一化,避免因组织重量、细胞数、产物体积等因素造成的人为误差;例如,统一全部检测样本浓度为1-2mg/mL,进行后续的稀释和检测。


现目前肥城市内比较知名且大型的医院如肥城市人民医院(二甲)、肥城市中医医院(三甲)、肥城市第二人民医院(二级)等等医院都还没法做试管婴儿,肥城本地的不孕不育患者要做试管婴儿的话,建议前往邻近的泰安市,现目前泰安有一家医院可做试管,而且其成功率也比较高,达到了国内先进水平。不过做试管三年二促三移都失败了,还是要先明确失败的原因,做好调整在做试管才比较好。

肥城是山东省辖县级市,由泰安市代管。虽然本地没有做试管的医院,但是泰安市有,而且离肥城较近的山东省省会城市济南也有不少可做试管的医院。下面就为大家介绍一下肥城附近的试管医院:

1.泰安市中心医院,位于泰安市龙潭路29号,目前该医院试管婴儿技术成功率达50%左右,达国内先进水平;

2.山东大学附属生殖医院,位于济南市经六纬五路157号,该医院辅助生殖助孕妊娠率为50%-60%,达到国际先进水平,在国内处于领先地位;

3.山东省妇幼保健院,位于济南市经十东路238号,目前该医院试管婴儿的成功率维持在60%左右;

4.山东中医药大学附属医院,位于济南市历下区文化西路42号,该医院试管成功率在50%左右;

5.山东中医药大学第二附院,位于济南市市中区经八路1号,该医院试管成功率在45%-55%左右;

6.山东大学齐鲁医院,位于济南市历下区文化西路107号,该医院试管成功率在55%左右;

7.济南市中心医院,位于济南市历下区解放路105号,该医院试管成功率在48%-52%左右;

8.解放军第960医院,位于济南市天桥区师范路25号,该医院试管平均成功率在50%左右。

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参考资料
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